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    1. 微生物學(xué)實驗報告

      時間:2025-02-09 09:04:44 曉麗 實驗報告 我要投稿
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      微生物學(xué)實驗報告(通用12篇)

        在人們素養(yǎng)不斷提高的今天,報告不再是罕見的東西,我們在寫報告的時候要注意邏輯的合理性。那么什么樣的報告才是有效的呢?以下是小編精心整理的微生物學(xué)實驗報告,僅供參考,歡迎大家閱讀。

      微生物學(xué)實驗報告(通用12篇)

        微生物學(xué)實驗報告 1

        一、實驗名稱

        用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動

        二、實驗?zāi)康?/strong>

        1、初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。

        2、觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布

        三、實驗原理

        高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的`葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),觀察細(xì)胞質(zhì)的流動,可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運動做為標(biāo)志。

        四、材料用具

        蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養(yǎng)皿,鉛筆

        五、實驗過程(見書p30)

        1、制作蘚類葉片的臨時裝片

        2、用顯微鏡觀察葉綠體

        3、制作黑藻葉片臨時裝片

        4、用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動

        六、討論

        1、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動,為什么?

        2、葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系?

        3、植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),這對于活細(xì)胞完成生命活動有什么意義?

        4、用鉛筆畫一個葉片細(xì)胞,標(biāo)出葉綠體的大致流動方向。

        微生物學(xué)實驗報告 2

        實驗?zāi)康?/strong>

       、睂W(xué)習(xí)并掌握動物細(xì)胞培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。

       、擦私庠(xì)胞培養(yǎng)的基本方法及操作過程。

        ⒊學(xué)習(xí)細(xì)胞計數(shù)及營養(yǎng)液的配制。

        實驗原理

       、奔(xì)胞原代培養(yǎng)

        原代細(xì)胞培養(yǎng)是指直接從動物體內(nèi)獲取的細(xì)胞、組織和器官,經(jīng)體外培養(yǎng)后,直到第一次傳代為止。這種培養(yǎng),首先用無菌操作的方法,從動物體內(nèi)取出所需的組織(或器官),經(jīng)消化,分解成單個游離細(xì)胞,在人工培養(yǎng)下,使其不斷的生長及繁殖。

        細(xì)胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒灱夹g(shù)。要使細(xì)胞能在體外長期生長,必須滿足兩個基本要求:一是供給細(xì)胞存活所必須的條件,如適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長因子、氧氣、適宜的溫度,注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調(diào)節(jié)。二是嚴(yán)格控制無菌條件。

       、布(xì)胞死活鑒定死活細(xì)胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法是常用的細(xì)胞死活鑒定方法,簡便,易于操作。不同的死活細(xì)胞鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機理,但無論采用何種辦法,都是利用了死活細(xì)胞在生理機能和性質(zhì)上的`差異。

        染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法,根據(jù)染色機理的不同,染料或使死細(xì)胞著色,或使活細(xì)胞著色。

        死活細(xì)胞在生理機能和性質(zhì)上的差異主要包括:

        ☆死活細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異:活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜,對細(xì)胞起保護和屏障作用,只允許物質(zhì)選擇性的通過;而細(xì)胞死亡之后,細(xì)胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍(lán)鑒別細(xì)胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。臺盼藍(lán),又稱錐藍(lán),是一種陰離子型染料,不能透過完整的細(xì)胞膜。所以經(jīng)臺盼藍(lán)染色后只能使死細(xì)胞著色,而活細(xì)胞不被著色。甲基藍(lán)有類似的染色機理。植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離也可鑒定死活。

        ☆死活細(xì)胞在代謝上的差異:是采用美藍(lán)染料鑒定酵母細(xì)胞死活的依據(jù)。美藍(lán)是一種無毒染料,氧化型為藍(lán)色,還原型為無色。由于活細(xì)胞中新陳代謝的作用,使細(xì)胞內(nèi)具有較強的還原能力,能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化性變?yōu)闊o色的還原型,因此美藍(lán)染色后活的酵母細(xì)胞無色;而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞,則因它們的無還原能力或還原能力極弱,使美藍(lán)處于氧化態(tài),從而被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。

        除此之外,還有一些細(xì)胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料,可以使活細(xì)胞液泡著紅色,而細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被著色;死細(xì)胞的液泡不被著色或淺染,染料彌散于整個細(xì)胞中,細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被染成紅色。有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用,如甲基藍(lán)-中性紅混合染色法。

        實驗用品

       、辈牧闲“资

       、苍噭

        臺盼藍(lán)、伊紅、PBS緩沖液、細(xì)胞培養(yǎng)液(含生長因子)

       、称鞑

        剪子、棉球、75%酒精、移液槍、無菌操作臺、正置光學(xué)顯微鏡、倒置光學(xué)顯微鏡、解剖盤、滴管、離心管、離心機、注射器、Eppendorf管、培養(yǎng)皿、酒精燈、塑料培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、血細(xì)胞計數(shù)板

        實驗步驟

        ⒈取材

        取小鼠一只,采用斷頭法處死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min,取出轉(zhuǎn)入超凈工作臺內(nèi)的解剖盤中,無菌操作打開腹腔,取出其脾臟,除去其周圍的`脂肪組織,并用PBS液自上而下淋洗1-2次,轉(zhuǎn)入無菌培養(yǎng)皿中待用。

       、卜蛛x脾細(xì)胞

        用滴管向培養(yǎng)皿中注入30滴PBS緩沖液,再用“L”型針頭注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾臟,注射時沿長軸注射。然后再用針頭在脾臟上扎眼,并用“L”型針頭輕輕刮出脾細(xì)胞。在均勻吹勻脾臟細(xì)胞。

        吸取上述分離的單個脾細(xì)胞懸液,放入Eppendorf管中,使量至1mL,以1000r/min離心5min。⒊培養(yǎng)脾細(xì)胞

        取塑料培養(yǎng)皿一套,用移液槍吸取培養(yǎng)液2mL加入塑料皿中,并將皿標(biāo)記待用。取離心后的Eppendorf管,棄去上清液,用移液槍(200ul)吸取塑料皿中的培養(yǎng)液400ul加入棄去上清的Eppendorf管中,用槍頭吹勻管底的脾細(xì)胞,吸取200ul脾細(xì)胞懸液接種于上述塑料皿中,混勻后放入37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

       、磁渲迫疽

        用生理鹽水配成5%臺盼藍(lán)染液,備用。⒌染色

        取0.5mL細(xì)胞懸濁液放入試管中,加入1-2滴染液。混合。2-5min后將細(xì)胞放在血細(xì)胞計數(shù)板上觀察死活情況,注意不要有

        氣泡產(chǎn)生,放大倍數(shù)為10x10。染色后活細(xì)胞不著色,死細(xì)胞顯示藍(lán)色。注意染色時間不能超過15min,否則染液將細(xì)胞毒殺。

       、队嫈(shù)

        在10x10倍的顯微鏡下觀察,計算血細(xì)胞計數(shù)板的4個4小方格的細(xì)胞數(shù)量。包括細(xì)胞總數(shù)與死細(xì)胞數(shù)量。壓線者計上不計下,計左不計右。

       、酚嬎慵(xì)胞活力

        根據(jù)公式:細(xì)胞活力=(總細(xì)胞數(shù)-死細(xì)胞數(shù))/總細(xì)胞數(shù)×100%

        實驗結(jié)果

        臺盼藍(lán)染色后的細(xì)胞(10x10)伊紅染色后的細(xì)胞(10x10)

        總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計表(10×10)

        項目自己培養(yǎng)細(xì)胞老師培養(yǎng)細(xì)胞總細(xì)胞數(shù)個/ml活細(xì)胞數(shù)個/ml細(xì)胞活力1.4×1067.5×1053.0×1055.5×10521.4%73.3%分析與討論

       、苯Y(jié)果分析

        本次實驗中我們小組自己培養(yǎng)細(xì)胞所測細(xì)胞活力為21.4%,并不算高,分析得應(yīng)有以下原因可能影響實驗結(jié)果(包括誤差):

       、湃粼跓o菌操作的過程中操作不規(guī)范,導(dǎo)致染菌,會極大的影響觀察,導(dǎo)致實驗失敗。

        ⑵若在離心分離呈單細(xì)胞的過程中離心機轉(zhuǎn)速過快或時間過長很可能會導(dǎo)致細(xì)胞破裂,導(dǎo)致小鼠脾細(xì)胞大量死亡。

       、侨旧珪r間過長,或觀察時間過長都會導(dǎo)致染色試劑將細(xì)胞殺死,使細(xì)胞活力驟降,這是導(dǎo)致細(xì)胞活力比較低的重要原因。

       、葘嶒炛械囊恍┎僮鞑徽_或不規(guī)范的情況、計算帶來的誤差等也會直接導(dǎo)致實驗誤差。

        ⒉注意事項

       、艊(yán)格進行動物消毒,需用75%酒精消毒。

       、茋(yán)格進行無菌操作,防止細(xì)菌、霉菌、支原體污染,避免化學(xué)物質(zhì)污染。

       、俏∫后w前,瓶口和吸管硬行火焰消毒;吸取液體時,避免碰撞。

       、入x心管入臺前,管口、管壁應(yīng)消毒。

       、蓪嶒炚唠x開超凈臺時,要隨時用肘部關(guān)閉工作窗。

        ⑹器材使用時既要注意用火焰消毒,又要防止?fàn)C傷、燙死細(xì)胞。

        微生物學(xué)實驗報告 3

        一、實驗報告的特點

        1.實錄性實驗報告是實驗研究工作的如實記錄。內(nèi)容包括整個實驗的主要過程,如實驗步驟、方法、實驗結(jié)果等。

        2.科學(xué)性科技實驗報告既可以描述創(chuàng)新的內(nèi)容,又可以記述重復(fù)實驗的工作。另外,實驗報告可以不要求具有明確的結(jié)論,只要對科學(xué)研究有參考或借鑒價值,無論結(jié)果是否達(dá)到預(yù)期要求,都可以寫成科學(xué)實驗報告。

        3.目的性以如實記載實驗過程與結(jié)果為目的的所有科學(xué)實驗工作都可以寫成科技實驗報告

        4.規(guī)范性一般的實驗報告如分析報告、教學(xué)中的實(試)驗報告、病理化驗單等,內(nèi)容比較單一,而且項目固定,并按一定的格式印成表,由實驗者根據(jù)要求逐項填寫;比較復(fù)雜的實驗,要按一定的格式寫成實驗報告,其寫作方法具有特定的規(guī)范性。

        二、實驗報告的種類

        教學(xué)實驗報告這類實驗報告主要指理工科學(xué)生撰寫的實驗報告。重復(fù)科學(xué)技術(shù)史上前人已做過的實驗,目的是為了驗證某一學(xué)科定律或結(jié)論,訓(xùn)練學(xué)生的動手能力和表達(dá)能力。其實驗步驟和方法一般是由教師自己擬定的,只不過是教學(xué)中的一個環(huán)節(jié)。這種實驗報告通常印制成表格,由實驗者逐項填寫。它是重復(fù)前人已做過的實驗,不具有學(xué)術(shù)價值。

        三、實驗報告的格式寫法

        實驗報告的寫作格式主要包括以下幾個部分:

        1.標(biāo)題即實驗或試驗項目的名稱。有時在項目之前加“關(guān)于”兩字。如“關(guān)于xxx的實驗報告”。實驗報告標(biāo)題要力求明確、醒目,集中映實驗的內(nèi)容。

        2.摘要摘要是對報告內(nèi)容不加注釋和評論的簡短陳述,內(nèi)容具有立性、自含性,即不閱讀報告的全文,就能獲得必要的信息。也供文摘等二次文獻(xiàn)采用。寫摘要要注意:一般應(yīng)說明實驗的目的、方法、結(jié)果和最終結(jié)論等;一般不用圖、表、化學(xué)結(jié)構(gòu)式等;字?jǐn)?shù)一般不超過200字;位于正文之前。

        3.正文

        (1)引言。引言部分應(yīng)是一系列間題的說明,如:研究的對象、實驗的意義和作用;此前該項工作的發(fā)展概況以及存在的問題;本實驗要達(dá)到的目標(biāo),等等。引言要使用概括性的語言敘述,較重要的地方才略作說明,而且點到為止。

        (2)主體。

       、賹嶒炘。實驗原理是進行科學(xué)實驗的理論依據(jù),因此,在寫作時要做到細(xì)致準(zhǔn)確。其內(nèi)容主要包括:簡要介紹實驗涉及的主要概念、主要定律、公式等。原理部分的文字應(yīng)做到簡明、清晰,易懂。對于比較復(fù)雜和比較新穎的實驗,或者考慮到讀者并非都是專家的情況下,可以對實驗所依據(jù)的理論作簡要的`說明。否則,原理部分可以省略

        ②實驗設(shè)備和方法步驟。實驗設(shè)備是實驗報告中比較重要的部分。有關(guān)實驗設(shè)備應(yīng)說明其原理、結(jié)構(gòu)、型號、性能,若有自主設(shè)計制造的設(shè)備,還要附必要的`圖紙和表格,另外還要敘述實驗的條件和對實驗的具體要求。

        實驗方法是實驗?zāi)芊癯晒Φ谋匾獥l件之一。在寫作時要敘述得全面完整、準(zhǔn)確無誤。在說明實驗裝置時,一般按空間順序來表述,說明操作程序時,般按時間順序來表述。

        化學(xué)實驗中的試劑,應(yīng)標(biāo)明形態(tài)、濃度、成分等。③結(jié)果與討論。這部分是實驗報告的主體,也是讀者最為關(guān)注的實質(zhì)性內(nèi)容,應(yīng)力爭寫好。實驗結(jié)果一般都用專業(yè)術(shù)語表述,引用的數(shù)字要真實,報告中的圖表、數(shù)字要符合規(guī)范要求。如果實驗結(jié)果的記錄失真,將使實驗報告喪失科學(xué)價值。

        討論就是從理論上對實驗所得結(jié)果進行分析、解釋,闡明結(jié)果的必然性。通常是分條進行討論,要求簡短,這也是實驗報告與實驗型論文的區(qū)別所在。報告討論的內(nèi)容可包括:對實驗結(jié)果進行具體分析、說明影響實驗的根本因素、實驗結(jié)果的適用范圍及與理論結(jié)果的差別等。

        (3)結(jié)論即對實驗結(jié)果進行總結(jié)評價,同時逐條列出實驗結(jié)果。應(yīng)當(dāng)用簡練、肯定的語言表達(dá),必要時可引用關(guān)鍵性數(shù)據(jù),但不再列圖表,不再提出新的事實、證據(jù)或材料。

        4.致謝致謝是對實驗中給予助的單位或個人表示感謝。

        實驗報告的構(gòu)成并非千篇一律,由于實驗有定性實驗、定量實驗、結(jié)構(gòu)分析實驗、析因?qū)嶒灐φ諏嶒、模擬實驗等類型,因此,寫作時重點應(yīng)有所不同。以上六項構(gòu)成項目,只是實驗報告的基本構(gòu)成內(nèi)容。

        四、實驗報告的寫作要求

        I.做好實驗是前提要寫好實驗報告,實驗前一定要熟悉實驗原理、儀器設(shè)備、操作方法。在實驗中,要按步驟操作,細(xì)心觀察現(xiàn)象,正確測取數(shù)據(jù),認(rèn)真做好記錄。

        2.做好實驗后的綜合與分析對實驗過程中的各種現(xiàn)象以及最后的結(jié)果都要逐一分析,通過分析,揭示出其本質(zhì)的東西,這也是寫好實驗報告的關(guān)鍵。并在此分析的基礎(chǔ)上進一步綜合加工,才真正_卜升到理性認(rèn)識,使理論與實驗統(tǒng)一起來。這一過程就是實驗報告由起草到定稿的過程。

        3.堅持客觀嚴(yán)肅的寫作態(tài)度不經(jīng)重復(fù)實驗不得修改數(shù)據(jù);在處理數(shù)據(jù)時,遇到誤差分析和有效數(shù)字位數(shù)的問題,應(yīng)按有關(guān)要求執(zhí)行。

        4.運用準(zhǔn)確嚴(yán)密的表達(dá)方式

        (1)充分利用圖表。圖表比文字?jǐn)⑹鲆庇^、簡潔、明了。

        (2)說明的準(zhǔn)確性、條理性。實驗報告的主要表達(dá)方式是說明,要求說明準(zhǔn)確,言之有序。即在說明物質(zhì)的性狀時要定性、定量;在說明實驗設(shè)備、步驟和方法時要條理分明。

        微生物學(xué)實驗報告 4

        一、【實驗?zāi)康摹?/strong>

        1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。

        2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。

        3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。

        4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。

        二、【實驗原理】

        1、質(zhì)粒DNA的制備方法

        質(zhì)粒(Plasmid)是獨立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子,分布于細(xì)菌、放線菌、真菌以及一些動植物細(xì)胞中,但在細(xì)菌細(xì)胞中含量最多。細(xì)菌質(zhì)粒大小介于1~200Kb之間,是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類群,在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)它們利用宿主細(xì)胞的復(fù)制機構(gòu)合成質(zhì)粒自身的DNA。

        質(zhì)粒DNA的制備包括3個步驟:①培養(yǎng)細(xì)菌,使質(zhì)粒DNA大量擴增;②收集和裂解細(xì)菌;③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括:堿裂解法:0.2molNaOH+1%SDS;煮沸裂解法:沸水煮沸40秒;SDS裂解法:10%SDS,一般用于質(zhì)粒大量提取。在實際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點以及質(zhì)粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。

        2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法

        在細(xì)菌細(xì)胞中,染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來,但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達(dá)12.0的堿性溶液中,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性;共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂,但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓?fù)鋵W(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用pH值4.6的KAc(NaAc)高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時,變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中;但染色體DNA不能復(fù)性,而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心,與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA,可用無水乙醇和鹽溶液,使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類似,乙醇沉淀

        DNA的同時,也伴隨著RNA沉淀,可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白,可通過酚/氯仿抽提除去,最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。

        3、凝膠電泳進行DNA分離純化

        電泳(electrophoresis)是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下,可以解離成帶電荷的離子,在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質(zhì),它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場中,其中的電離子會發(fā)生移動,移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異,就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而,凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段,是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。

        凝膠電泳技術(shù)操作簡單而迅速,分辨率高,分辨范圍廣。此外,凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠(ethidium bromide,EB)或SYBR Gold染色直接觀察到,甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話,這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收,用于各種各樣目的的實驗。

        分子生物學(xué)中,常用的兩種凝膠為瓊脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑,也能以許多不同的構(gòu)型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,使用于較小分子核酸(5—500bp)的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高,長度上相差1bp或質(zhì)量上相差0.1%的DNA都可以彼此分離,這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進行電泳,并能容納較大的DNA上樣量,但是與瓊脂糖凝膠相比,在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物,由β—D—吡喃半乳糖與3,6—脫水—L—吡喃半乳糖組成,相對分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右,即可溶化形成清亮、透明的液體,澆在模版上冷卻后形成凝膠,其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低,但它的分離范圍更大(50至百萬bp),小片段DNA(50—20000bp)最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作,適用于核酸電泳,測定DNA的相對分子質(zhì)量,分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段,進一步純化DNA等。

        瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中,由于核酸有磷酸基而帶有負(fù)電荷,在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素:樣品DNA分子的大小、DNA分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。

        三、【實驗材料】

        1、實驗儀器

        培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1.5ml塑料離心管(Eppendorf管)、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。

        2、實驗試劑

        LB培養(yǎng)基,抗生素Ap(氨芐青霉素),溶液Ⅰ,溶液Ⅱ,溶液Ⅲ,RNaseA母液,TE緩沖液,飽和酚,氯仿/異戊醇混合液,酚/氯仿/異戊醇(PCI)混合液,預(yù)冷無水乙醇,TAE電泳緩沖液(10×),上樣緩沖液(6×),瓊脂糖,溴化乙錠(EB),DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物DNA Marker λ/Hind Ⅲ,5mol/L pH 5.2的醋酸鈉。

        四、【實驗步驟】

        1、準(zhǔn)備實驗

        配制LB液體培養(yǎng)基,分裝到100ml的三角瓶中20ml,300ml的三角瓶中50ml,另配LB固體培養(yǎng)基;準(zhǔn)備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒,1.5ml離心管若干于500ml三角瓶中,50ml離心管2個 ,將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。

        2、菌體培養(yǎng)

        在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落,接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng),培養(yǎng)基中加Ap100ul

       。100ug/ml),質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因,使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大,雜質(zhì)較多,然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mlLB液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基中加入Ap250ul,37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數(shù)生長期后期,生長速率快,代謝旺盛,酶系活躍,雜質(zhì)少,適合提取質(zhì)粒。

        3、質(zhì)粒提取

       。1)稱量空的50ml離心管的重量為14.331g,然后將三角瓶中的菌液倒至管中,不能倒?jié)M,液面距管口約1cm,7000rpm離心5分鐘后棄去上清液,收集菌體細(xì)胞。

       。2)向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌,用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻,同步驟(1)離心,棄去上清,將離心管倒置于吸水紙上,使上清液全部流盡干燥,然后稱重得14.437g,則菌體質(zhì)量為106mg。

        (3)洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液Ⅰ1ml,106mg菌體按100mg菌體處理,加入溶液Ⅰ1ml,打散菌泥、吹吸混勻,冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使

        溶液密度增加,懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部;維持滲透壓,防止細(xì)胞提前破裂,防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑,可抑制DNase的活性,抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒H。

       。4) 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml(與溶液Ⅰ對應(yīng)),輕加輕搖,冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細(xì)胞膜發(fā)生了從bilayer(雙層膜)結(jié)構(gòu)向micelle(微囊)結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細(xì)胞溶解。同時,強堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性;SDS為下一步沉淀做鋪墊。

        (5)按比例加入冰預(yù)冷的溶液Ⅲ1.5ml(與溶液Ⅰ、Ⅱ?qū)?yīng)),輕加輕搖,冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物、細(xì)胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH,因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA,只要是50-100 kb大小的片斷,就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質(zhì)粒DNA復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。

       。6)12000rpm離心15min,白色沉淀聚集在離心管一側(cè),用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的.3MNaAc混勻,加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng),對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當(dāng)加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負(fù)電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。

       。7) 以12000rpm離心15min,小心倒去上清液,得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇,輕輕地覆蓋沉淀,不打散沉淀,洗滌一次。

       。8)以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液,將離心管上沉淀部位做好標(biāo)記,將離心管倒置于吸水紙上,干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色,隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒,要在離心管上標(biāo)記質(zhì)粒所在位置。

       。9)將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中,移液槍吹吸助溶,然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液,為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài),呈弱堿性,有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑,抑制DNA酶作用。

        4、質(zhì)粒純化

        (1)Eppendorf管中加入RNase A(純濃度>50ug/ml),37℃保溫0.5—1h

       。2)將上述的溶液平均分配到2個1.5ml的微量離心管中,每管0.5ml,分別加入與溶液等體積的(500ul)Tris飽和苯酚溶液,振蕩混勻,7000rpm,離心5min,上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的,顯黃色。苯

        酚加入后,溶液分層,苯酚向下,下層呈淺黃色,上層溶液無色,在中間產(chǎn)生大量白色沉淀,此為變性后的蛋白質(zhì)。

       。3)加入等體積的(500ul)苯酚/氯仿溶液(1:1),振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑,但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會影響DNA的酶切,它本身易被氧化,會損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑,但是比酚弱,且能溶解質(zhì)粒中的脂類,溶解苯酚,去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫,有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀,但仍有蛋白質(zhì)的存在。

        (4)加入等體積的氯仿溶液,振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中,得上清液400ul。

       。5)向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻,再加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。

        (6)以12000rpm,離心15min,棄去上清液,得到DNA沉淀,為白色。

        (7)向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul,不打散沉淀,洗滌。然后以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。

       。8)去掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。

        5、質(zhì)粒檢測

       。1)稱取0.4g的瓊脂糖,置于一錐形瓶中,在三角瓶上標(biāo)好液面位置,加入40ml的1×TAE電泳緩沖液,再加入5—10ml重蒸水,以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化,溶液透明。冷卻至50℃左右,倒入制板槽制板。

       。2)待膠凝固后,小心拔起梳子,使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液,至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上,用移液槍混勻。

       。3)電泳1h,觀察溴酚蘭的帶(藍(lán)色)的移動。

        (4) 把膠槽取出,小心滑出膠塊,放進EB溶液中進行染色,完全浸泡約5min。

       。5)凝膠成像儀觀察。

        五、【注意事項】

       。1)滴加溶液II時,要逐滴加入,且要輕加輕搖溶液使之混勻,整體動作要快,因為強堿在溶液中停留時間不能過長,否則會破壞質(zhì)粒DNA。

       。2)加入溶液III后,生成了大量的絮狀沉淀,溶液III中和強堿使質(zhì)粒復(fù)性,不可劇烈震蕩, 防止染色體DNA斷裂,應(yīng)該上下顛倒離心管,使其混勻。

        微生物學(xué)實驗報告 5

        【探究內(nèi)容】

        探究種子萌發(fā)的環(huán)境條件

        【探究目的】

        1、了解種子萌發(fā)需要的環(huán)境條件。

       。、學(xué)會進行探究實驗的一般方法。

        【探究器材】

        種子100粒、5個能蓋緊的罐頭瓶、小勺一個、餐巾紙10張、標(biāo)簽紙5張

        【探究過程】

        提出問題:光的強弱會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?水的多少會對種子的萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?溫度的高低會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?空氣的流通會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?

        做出假設(shè):光的強弱、水的多少、溫度的高低都會對種子的萌發(fā)產(chǎn)生一定的影響。

        制定計劃:準(zhǔn)備100顆綠豆種子,5個有蓋的'瓶子,10張紙巾,5張便利貼。1號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,放在空氣流通,有陽光的地方;2號瓶的水不但能濕透紙巾,而且能把種子淹沒,放在空氣流通,有陽光的地方;3號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,用蓋子把瓶子蓋上,使瓶子空氣不能流通;4號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,放在冰箱里,盡量使瓶子里的水不結(jié)冰;5號瓶不放水,放在空氣流通,有陽光的地方。

        實施計劃:每天都進行實驗并觀察5個瓶子有什么變化,再把每天的變化都紀(jì)錄下來。

        分析結(jié)果:1號瓶大部分能發(fā)芽;2號瓶的種子皮破了,但不能發(fā)芽;3號瓶只有少許發(fā)了芽;4號瓶和5號瓶沒有發(fā)芽

        得出結(jié)論:想要種子發(fā)芽,一定要有適宜的光度;需要適量的水分,溫度也要控制好,空氣的流通也有一定的影響,但影響沒有光度、水分和溫度大,相對來說,空氣流通的影響較小。

        這個實驗很簡單,我們在做實驗要分以上幾步完成,就會很容易的完成實驗。

        【交流與評估】

        1、根據(jù)你的問題和假設(shè),應(yīng)當(dāng)將種子分成幾組?XX每組應(yīng)有多少粒種子?XX每組只有一粒種子可以嗎?

        2、對照組應(yīng)提供的溫度、水分、空氣等條件應(yīng)該如何?

        3、每個實驗組的處理,除了所研究的條件外,其他環(huán)境條件是否應(yīng)與對照組相同?

        微生物學(xué)實驗報告 6

        一、實驗?zāi)康模?/strong>

        1、通過對原核和真核各種形態(tài)細(xì)胞的光學(xué)顯微鏡觀察,了解細(xì)胞的形態(tài)及其顯微結(jié)構(gòu);

        2、學(xué)習(xí)顯微測量的方法,對細(xì)胞的大小有一直觀認(rèn)識。

        二、實驗材料和儀器:

        小白鼠肝細(xì)胞切片;雞血紅細(xì)胞;蠶豆葉片橫切片;

        普通光學(xué)顯微鏡;目鏡測微尺;鏡臺測微尺;載玻片;蓋玻片。

        三、實驗步驟:

        (一)細(xì)胞形態(tài)觀察

        l、動物細(xì)胞的觀察

       。1)人肝細(xì)胞切片:在顯微鏡下仔細(xì)觀察肝細(xì)胞的形態(tài)構(gòu)造。

       。2)雞血細(xì)胞涂片的觀察:觀察血細(xì)胞的組成;紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板的形態(tài)特點。

        2、植物細(xì)胞的觀察

        取蠶豆葉片橫切片的觀察:注意表皮細(xì)胞和葉肉細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)。

       。ǘ┘(xì)胞的.大小和測量

        1、卸下目鏡的上透鏡,將目鏡測微尺刻度向下裝在目鏡的焦平面上,再旋上目鏡的上透鏡。

        2、將鏡臺測微尺刻度向上放在鏡臺上夾好,使測微尺分度位于視野中央。調(diào)焦至能看清鏡臺測微尺的分度。

        3、小心移動鏡臺測微尺和轉(zhuǎn)動目鏡測微尺(如目鏡測微尺分度模糊,可轉(zhuǎn)動目鏡上透鏡進行調(diào)焦),使兩尺左邊的一直線重合,然后由左向右找出兩尺另一次重合的直線。

        4、記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)。按下式計算目鏡測微尺每格等于多少μm:

        鏡臺測微尺的格數(shù)

        目鏡測微尺每格的微米數(shù)=————————— × 10

        目鏡測微尺的格數(shù)

        四、實驗結(jié)果:

        1、目鏡校正:40倍顯微鏡目鏡測微尺每格的微米數(shù)=17/70=0.24

        2、細(xì)胞大小的測量:

        五、作業(yè)與思考:

        1、血細(xì)胞按含量高低,主要含有:紅細(xì)胞,白細(xì)胞,血小板。

        白細(xì)胞最大,紅細(xì)胞次之,血小板最小。紅細(xì)胞:主要的功能是運送氧。 白細(xì)胞:主要扮演了免疫的角色,當(dāng)病菌侵入人體時,白細(xì)胞能穿過毛細(xì)血管壁,集中到病菌入侵部位,將病菌包圍,吞噬。血小板:止血過程中起著重要作用。細(xì)胞形態(tài)見下圖。

        2、植物細(xì)胞一般比動物細(xì)胞大一些。形態(tài)圖見下。

        3、在不同放大倍數(shù)下,測定的細(xì)胞大小基本一致,但有一些偏差。放大倍數(shù)越大,在視野中同等實際距離下的兩點視野距離更大,而更容易測量準(zhǔn)確。

        微生物學(xué)實驗報告 7

        一、實驗原理

        當(dāng)外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度時,根據(jù)擴散作用原理,水分子會由細(xì)胞液中滲出到外界溶液中,通過滲透作用失水;由于細(xì)胞壁和原生質(zhì)層的伸縮性不同,細(xì)胞壁伸縮性較小,而原生質(zhì)層伸縮性較大,從而使二者分開;反之,外界溶液濃度小于細(xì)胞液濃度,則細(xì)胞通過滲透作用吸水,分離后的質(zhì)和壁又復(fù)原。

        二、目的要求

        1.初步學(xué)會觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的方法;

        2.理解植物細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離和復(fù)原的原理。

        三、重點難點(實驗報告不寫這一點,可適當(dāng)調(diào)整添加在“注意”這一部分)

        1.初步掌握植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的實驗方法;

        2.臨時裝片的`制作;

        3.低倍顯微鏡的使用。實驗器材:紫色洋蔥的鱗片葉、刀子、鑷子、滴管、載玻片、蓋玻片、吸水紙(濾紙代替,濾紙可分為剪開幾條)、顯微鏡;

        四、方法步驟

        臨時裝片制作:

        1選材:選用紫色特別深的洋蔥外表皮;說明:在實驗之前,最好將洋蔥放在水中浸泡一下,可以使洋蔥吸水多一些,而且代謝也比較旺盛,實驗效果明顯。

        2:將洋蔥的外層剝?nèi)蓪樱ㄒ驗樘幱谧钔獾目赡芤呀?jīng)死亡)。取表皮:在洋蔥的外表皮上,用刀片劃“井”字,用鑷子輕輕撕取一小塊;(關(guān)鍵:最好撕取單層細(xì)胞,如果撕的太厚,則會使細(xì)胞重疊,嚴(yán)重影響實驗效果;)

        3制片:在載玻片中央滴上一滴純凈水,然后將取下的洋蔥表皮放在水中,輕輕展開。確保洋蔥表皮平整無卷曲,并且水中不能有氣泡。接著,將蓋玻片以45°角慢慢放置在載玻片上,確保清水充滿載玻片和蓋玻片之間的空間,使其擠出所有空氣。

        4蓋玻片一端滴入糖水,于另一端用吸收紙重復(fù)幾次吸引(可重復(fù)幾次滴糖水和吸引的過程)。

        質(zhì)壁分離實驗后可接著進行質(zhì)壁復(fù)原

        質(zhì)壁復(fù)原實驗

        處理

        取下臨時裝片,在一側(cè)滴入清水,另一側(cè)再用吸水紙重復(fù)幾次吸引,以確保洋蔥表皮細(xì)胞完全浸在幾乎是清水中;(注:無吸水紙可先用濾紙代替)

        觀察

        在低倍鏡下觀察到一個細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)了一個明顯的質(zhì)壁分離現(xiàn)象。細(xì)胞中央的液泡逐漸變大,顏色也變淺,最終細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞壁再次緊密結(jié)合在一起。如果質(zhì)壁分離沒有復(fù)原,那就說明外部溶液的濃度過高,導(dǎo)致了細(xì)胞的死亡。根據(jù)以上觀察,得出以下總結(jié):當(dāng)細(xì)胞內(nèi)液體的濃度小于外部溶液的濃度時,由于滲透作用,細(xì)胞會失去水分而發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象;而當(dāng)細(xì)胞內(nèi)液體的濃度大于外部溶液的濃度時,細(xì)胞則通過滲透作用吸收水分,并發(fā)生質(zhì)壁分離的復(fù)原現(xiàn)象。

        分離實驗特例

        如果外界溶液包括葡萄糖、硝酸鉀、氯化鈉、尿素和乙二醇等物質(zhì),當(dāng)細(xì)胞進行質(zhì)壁分離后,由于細(xì)胞主動或被動地吸收了溶質(zhì)微粒,導(dǎo)致細(xì)胞液濃度增加。這時,植物細(xì)胞會通過吸水使質(zhì)壁分離部分自動復(fù)原。

        注:質(zhì)壁分離與復(fù)原結(jié)構(gòu)示意圖

        微生物學(xué)實驗報告 8

        年級班實驗人:組次:試驗時間:

        一、探究目的

        1、通過探究幫助學(xué)生理解樺尺蠖體色變化的整個過程。

        2、理解保護色對生物生存的意義。

        二、探究步驟

        1、發(fā)現(xiàn)并提出問題:______________________________________。

        2、作出假設(shè):___________________________________________________ 。

        3、制定計劃:

        4、實施計劃:認(rèn)真記錄和分析探究的過程和結(jié)果和。

        5、得出結(jié)論:_________________________________________________________ 。

        6、表達(dá)交流。

        三、討論

        1、第一代和第二代之間有什么變化?

        2、第一代和第五代之間又有什么變化?

        3、你能推測保護色的`形成過程嗎?從中你能簡單分析生物進化的原因嗎?

        微生物學(xué)實驗報告 9

        實驗五比較酶和Fe3+的催化效率

        考點提示:

        (1)為何要選新鮮的肝臟?因為在不新鮮的肝臟中,過氧化氫酶的活性會由于細(xì)菌的破壞而降低。

        (2)該實驗中所用試管應(yīng)選較粗的還是較細(xì)的?為什么?應(yīng)選用較粗的,因為在較細(xì)的試管中容易形成大量的氣泡,而影響衛(wèi)生香的復(fù)燃。

        (3)為何要選動物的肝臟組織來做實驗,其他動植物的組織的研磨液能替代嗎?因為肝臟組織中過氧化氫酶含量較豐富;其它動植物組織也含有少量的過氧化氫酶,所以能夠替代。

        (4)相同質(zhì)量的塊狀肝臟和肝臟研磨液,哪一個催化效果好?為什么?研磨液效果好;因為它增加過氧化氫酶與過氧化氫的接觸面積。

        (5)滴入肝臟研磨液和氯化鐵溶液時,可否共用下個吸管?為什么?不可共用,防止過氧化氫酶與氯化鐵混合,而影響實驗效果。

        實驗六色素的提取和分離

        1、原理:葉綠體中的色素能溶解在有機溶劑丙酮或無水乙醇——提取色素

        各色素在層析液中的溶解度不同,隨層析液在濾紙上擴散速度不同——分離色素

        2、步驟:

        (1)提取色素研磨

        (2)制備濾紙條

        (3)畫濾液細(xì)線:均勻,直,細(xì),重復(fù)若干次

        (4)分離色素:不能讓濾液細(xì)線觸及層析液

        (5)觀察和記錄:結(jié)果濾紙條上從上到下依次為:橙黃色(胡蘿卜素)、黃色(葉黃素)、藍(lán)綠色(葉綠素a)、黃綠色(葉綠素b)。

        考點提示:

        (1)對葉片的要求?為何要去掉葉柄和粗的時脈?綠色、是深綠色。因為葉柄和葉脈中所含色素很少。

        (2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅對實驗有何影響?

        為了使研磨充分。不加二氧化硅,會使濾液和色素帶的顏色變淺。

        (3)丙酮的作用?它可用什么來替代?用水能替代嗎?

        溶解色素。它可用酒精等有機溶劑來代替,但不能用水來代替,因為色素不溶于水。

        (4)碳酸鈣的作用?不加碳酸鈣對實驗有何影響?

        保護色素,防止在研磨時葉綠體中的色素受到破壞。不加碳酸鈣,濾液會變成黃綠色或褐色。

        (5)研磨為何要迅速?要充分?過濾時為何用布不用濾紙?研磨迅速,是為了防止丙酮大量揮發(fā);只有充分研磨,才能使大量色素溶解到丙酮中來。色素不能通過濾紙,但能通過尼龍布。

        (6)濾紙條為何要剪去兩角?防止兩側(cè)層析液擴散過快。

        (7)為何不能用鋼筆或圓珠筆畫線?因為鋼筆水或圓珠筆油中含有其它色素,會影響色素的分離結(jié)果。

        (8)濾液細(xì)線為何要直?為何要重畫幾次?防止色素帶的重疊;增加色素量,使色素帶的顏色更深一些。

        (9)濾液細(xì)線為何不能觸到層析液?防止色素溶解到層析液中。

        (10)濾紙條上色素為何會分離?

        由于不同的色素在層析液中的溶解度不同,因而它們隨層析液在濾紙條上的`擴散速度就不同。

        (11)色素帶最寬的是什么色素?它在層析液中的溶解度比什么色素大一些?

        最寬的色素帶是葉綠素a,它的溶解度比葉綠素b大一些。

        (12)濾紙條上相互間距的是哪兩種色素?胡蘿卜素和葉黃素。

        (13)色素帶最窄的是第幾條色素帶?為何?

        第一條色素帶,因為胡蘿卜素在葉綠體的四種色素中含量最少。

        實驗七觀察質(zhì)壁分離和復(fù)原

        1、條件:細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度差,活細(xì)胞,大液泡

        2、材料:紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞(具紫色大液泡),質(zhì)量濃度0.3g/mL的蔗糖溶液,清水等。

        3、步驟:制作洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞臨時裝片→觀察→蓋玻片一側(cè)滴蔗糖溶液,另一側(cè)用吸水紙吸引→觀察(液泡由大到小,顏色由淺變深,原生質(zhì)層與細(xì)胞壁分離)→蓋玻片一側(cè)滴清水,另一側(cè)用吸水紙吸引→觀察(質(zhì)壁分離復(fù)原)

        4、結(jié)論:細(xì)胞外溶液濃度>細(xì)胞內(nèi)溶液濃度,細(xì)胞失水質(zhì)壁分離

        細(xì)胞外溶液濃度<細(xì)胞內(nèi)溶液濃度,細(xì)胞吸水質(zhì)壁分離復(fù)原

        知識概要:制片觀察加液觀察加水觀察

        考點提示:

        (1)洋蔥為何要選紫色的?若紫色過淡怎么辦?

        紫色的洋蔥有紫色的大液泡,便于觀察液泡的大小變化;縮小光圈,使視野變暗些。

        (2)洋蔥表皮應(yīng)撕還是削?為何?表皮應(yīng)撕不能削,因為削的表皮往往太厚。

        (3)植物細(xì)胞為何會出現(xiàn)質(zhì)壁分離?動物細(xì)胞會嗎?當(dāng)細(xì)胞失去水分時,其原生質(zhì)層的伸縮性大于細(xì)胞壁的伸縮性;動物細(xì)胞不會發(fā)生質(zhì)壁分離,因為動物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁。

        (4)質(zhì)壁分離時,液泡大小和顏色的變化?復(fù)原時呢?

        細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離時,液泡變小,紫色加深;當(dāng)細(xì)胞質(zhì)壁分離復(fù)原時,液泡變大,紫色變淺。

        (5)若發(fā)生質(zhì)壁分離后的細(xì)胞,不能發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原,其原因是什么?

        細(xì)胞已經(jīng)死亡(可能是外界溶液濃度過大,細(xì)胞失水過多或質(zhì)壁分離時間過長)

        (6)高倍鏡使用前,裝片如何移動?

        若要把視野中上方的物像移到視野的正中心,則要將裝片繼續(xù)向上移動。若要把視野中左方的物像移到視野的正中心,則要將裝片繼續(xù)向左方移動,因為顯微鏡視野中看到的是倒像。

        (7)換高倍物鏡后,怎樣使物像清晰?視野明暗度會怎樣變化?如何調(diào)亮?換高倍物鏡后,應(yīng)調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使物像變得清晰;視野會變暗,可調(diào)大光圈或改用反光鏡的凹面鏡來使視野變亮。

        (8)所用目鏡、物鏡的長度與放大倍數(shù)的關(guān)系?目鏡越長,放大倍數(shù)越小;物鏡越長,放大倍數(shù)越大。

        (9)物像清晰后,物鏡與載玻片之間的距離和放大倍數(shù)的.關(guān)系?

        物鏡與載玻片之間的距離越小,放大倍數(shù)越大。

        (10)總放大倍數(shù)的計算方法?放大倍數(shù)具體指面積的放大倍數(shù)還是長度的放大倍數(shù)?

        總放大倍數(shù)等于目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的乘積;放大倍數(shù)是指細(xì)小物體長度或?qū)挾鹊姆糯蟊稊?shù)。

        (11)放大倍數(shù)與視野中細(xì)胞大小、多少、視野明暗的關(guān)系?

        放大倍數(shù)越大,視野中細(xì)胞越大、數(shù)目越少、視野越暗。

        (12)更換目鏡,若異物消失,則異物在目鏡上;更換物鏡,若異物消失,則異物在物鏡上、移動載玻片,若異物移動,則異物在載玻片上。

        (13)怎樣利用質(zhì)壁分離現(xiàn)象來測定植物細(xì)胞液的濃度?①配制一系列濃度從小到大的蔗糖溶液②分別用以上不同濃度的溶液制成某植物細(xì)胞的臨時裝片③用顯微鏡觀察某植物細(xì)胞是否發(fā)生質(zhì)壁分離。某植物細(xì)胞液的濃度就介于不能引起質(zhì)壁分離的濃度和能引起質(zhì)壁分離的濃度之間。

        微生物學(xué)實驗報告 10

        一、實驗?zāi)康?/strong>

        1. 學(xué)會提取和分離葉綠體中色素的方法。

        2. 比較、觀察葉綠體中四種色素:理解它們的特點及與光合作用的關(guān)系

        二、實驗原理

        光合色素主要存在于高等植物葉綠體的基粒片層上,而葉綠體中的色素能溶于有機溶劑

        中。故要提取色素,要破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),破壞葉綠體膜,使基粒片層結(jié)構(gòu)直接與有機溶劑接

        觸,使色素溶解在有機溶劑中。

        葉綠體中的色素有四種,不同色素在層析液(脂溶性強的有機溶劑)中的溶解度不同,

        因而隨層析液的擴散速度也不同。

        三、材料用具

        取新鮮的`綠色葉片、定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、紗布、剪刀、小試管、培養(yǎng)皿、毛細(xì)吸管、量筒、有機溶劑、層析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸鈣。

        四、實驗過程(見書P54)

        1.提取色素:

        2.制備濾紙條:

        3.色素分離,紙層析法。(不要讓濾液細(xì)線觸及層析液)

        4.觀察:

        層析后,取出濾紙,在通風(fēng)處吹干。觀察濾紙條上出現(xiàn)色素帶的數(shù)目、顏色、位置和寬窄。結(jié)果是:4條色素帶從上而下依次是:胡蘿卜素(橙黃色)、葉黃素(黃色)、葉綠素a(藍(lán)綠色)、葉綠素b(黃綠色)。

        五、討論

        1.濾紙條上的濾液細(xì)線為什么不能接觸到層析液?

        2.提取和分離葉綠體中色素的關(guān)鍵是什么?

        微生物學(xué)實驗報告 11

        用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞:顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片,及其他細(xì)胞裝片。

        一、目的:

        在實驗過程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片,以供學(xué)生操作、觀察,增加了學(xué)生動手實驗的時間,使學(xué)生在實驗中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過程,從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。

        二、步驟:

        1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座,把顯微鏡向著光放在實驗臺上。

        2、對光:轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。

        3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡,從目鏡往下看,能看見亮的光圈。

        4、觀察:調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋,把所要觀察的.洋蔥表皮切片放在載物臺上,用壓片夾夾住,標(biāo)本要正對通光孔的中央。

        5、左眼向目鏡內(nèi)看,同時轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋等,直到看清切片上的細(xì)胞為止,最后整理器材。

        三、注意事項:

        1、取送顯微鏡時,應(yīng)右手握住鏡臂,左手托住鏡座,輕拿輕放。

        2、鏡檢時,坐姿端正,一般用左眼觀察物象,用右眼看著實驗報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。

        3、切忌一面從目鏡進行觀察,一面使鏡筒下降,這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。

        4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時,切勿使用粗調(diào)節(jié)器,以免壓壞標(biāo)本,損壞物鏡。

        5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒,移開鏡頭后再取出玻片標(biāo)本,以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。

        微生物學(xué)實驗報告 12

        一、實驗?zāi)康?/strong>

        1.初步學(xué)會探索酶的催化效率的`方法。

        2.探索過氧化氫酶和Fe3+催化效率的高低。

        二、實驗原理

        新鮮的豬肝中含有過氧化氫酶,F(xiàn)e3+是一種無機催化劑,它們都可以催化過氧化氫分解

        成水和氧

        三、材料用具

        質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的新鮮豬肝漿、滴管、試管、火柴、試管架、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.5%的氯化鐵溶液、體積分?jǐn)?shù)為3%的'過氧化氫溶液。

        四、實驗過程(見書P30)

        五、討論

        實驗中選擇新鮮的豬肝是因為新鮮的豬肝中的酶活性較高,能夠更有效地催化反應(yīng)。另外,新鮮的豬肝也能保證實驗結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。在滴入豬肝研磨液和氯化鐵溶液時,不可以公用一個吸管。這是因為兩種液體中可能含有不同的物質(zhì),通過公用一個吸管會導(dǎo)致交叉污染,影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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